体外转录是一种在无细胞系统中模拟生物体内转录过程的技术。通过提供适当的条件，包括核糖核酸转录酶、NTP等物质，以及将脱氧核糖核酸作为模板，可以实现对特定基因的转录控制，以及转录后RNA的定制化用途。
转录条件
为了确保体外转录的成功，转录模板需要满足以下条件：
1. 基因组全长克隆时，在正向引物5'端添加T7启动子序列。
2. 使用T7启动子作为体外转录的启动子，且在其后靶位序列为连续三个G时，转录效率最高。
3. 正向引物5'端添加一个帽子G，有助于提高体外转录RNA分子的侵染活性。
注意事项
1. 模板DNA必须包含T7启动子位点，并且应为RNase-free级别。在质粒提取过程中，若使用了RNase，则必须通过苯酚三氯甲烷处理等方式去除RNase。
参考资料
体外转录及翻译.体外转录及翻译.2024-10-24
体外转录(IVT)快速上手 | IVT转录比影响因素汇总.微信公众平台.2024-10-24
体外转录操作指南和使用推荐.体外转录操作指南和使用推荐.2024-10-24